細(xì)胞分選實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)原理

流式細(xì)胞分選是利用流式細(xì)胞分選儀，對(duì)細(xì)胞的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學(xué)性狀及功能狀態(tài)等進(jìn)行定性或定量檢測(cè)，它可根據(jù)發(fā)射光的熒光強(qiáng)度和波長(zhǎng)將發(fā)光顆粒亞群分開(kāi)并可實(shí)現(xiàn)單克隆分選，對(duì)復(fù)雜樣本中的細(xì)胞進(jìn)行鑒定、分類(lèi)、定量和分離。免疫磁珠細(xì)胞分選是把細(xì)胞用超級(jí)順磁性的 MACS MicroBeads （MACS微型磁珠）特異性地標(biāo)記，磁性標(biāo)記完后，把這些細(xì)胞通過(guò)一個(gè)放在強(qiáng)而穩(wěn)定磁場(chǎng)中的分選柱。分選柱里的基質(zhì)造成一個(gè)高梯度磁場(chǎng)。被磁性標(biāo)記的細(xì)胞滯留在柱里而未被標(biāo)記的細(xì)胞則流出。當(dāng)分選柱移出磁場(chǎng)后，滯留柱內(nèi)的磁性標(biāo)記細(xì)胞就可以被洗脫出來(lái)，這樣就*可以獲得標(biāo)記和未標(biāo)記的兩個(gè)細(xì)胞組份。

 實(shí)驗(yàn)流程

流式細(xì)胞分選

(1)取1式細(xì)胞⁵個(gè)待檢測(cè)的細(xì)胞，加5 ml DPBS洗滌，室溫2000 r/min離心5 min，棄上清，然后用200 μl 0.5% BSA-DPBS重懸細(xì)胞；

(2)想細(xì)胞懸液中加入熒光染料標(biāo)記的抗體，4℃孵育30 min；

(3)將染好的細(xì)胞用0.5% BSA-DPBS 洗滌兩次，然后用500 μl 0.5% BSA-DPBS重懸，流式細(xì)胞儀檢測(cè)；

(4)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析。

磁珠細(xì)胞分選方法

(1)離心收集待分離細(xì)胞，用少量PBE孵育液（0.5%BSA、0.08%EDTA，PH7.2），真空抽濾除菌及液體內(nèi)氣體，充分混懸細(xì)胞（0.5 ml/1及液體⁸細(xì)胞），加入一抗（10-20 μg/ml終濃度），4℃孵育30 min；

(2)用20倍體積PBE洗細(xì)胞一次，再加PBE（0.3 ml/1/ml⁸細(xì)胞）充分混懸細(xì)胞后，加入相應(yīng)二抗包被的超微磁珠，混勻后置8~15℃孵育10~15 min；

(3) 將分離柱安裝入磁場(chǎng)中，加入0.5 ml PBE，在重力作用下自然流盡,以預(yù)處理分離柱。

服務(wù)說(shuō)明

(1)客戶(hù)提供：待檢測(cè)細(xì)胞，分選細(xì)胞種類(lèi)。

(2)公司提供：基本實(shí)驗(yàn)步驟、圖片、數(shù)據(jù)分析結(jié)果。

(3)實(shí)驗(yàn)周期：2-3w，具體需要根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況及實(shí)驗(yàn)內(nèi)容而定。